.jpg.jpg)
本公司所有產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究使用，不得用于醫(yī)療診斷，食品，化妝品和其他用途。
產(chǎn)品信息價(jià)格說明書等相關(guān)資料，可以聯(lián)系客服咨詢索取。
HEPENGBIO體液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
HEPENGBIO體液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級(jí)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽，受到活性氧的氧化下，產(chǎn)生熒光，來定量檢測(cè)活性氧族的生成和增加的方法?？梢员挥糜诩?xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡?；钚匝跆禺愋蕴结槦晒馊玖?',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA），一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧化基、次氯酸等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測(cè)定活性氧族的濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO緩沖液（Reagent A） 5毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 50微升
HEPENGBIO稀釋液（Reagent C） 1毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
抗凝管：用于采血儲(chǔ)存的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和工作液配制的容器
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
黑色96孔板：用于樣品熒光染色的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光定量分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣品準(zhǔn)備
選擇一：血漿樣品
1． 準(zhǔn)備好抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
5． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升上述制備的血漿到新的1.5毫升離心管
7． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
8． 放在冰槽里待測(cè)
選擇二：血清樣品
1． 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管
2． 抽取1毫升血液，置于儲(chǔ)存管里
3． 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結(jié)
4． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
7． 移取10微升上述制備的血清到新的1.5毫升離心管
8． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
9． 放在冰槽里待測(cè)
選擇三：尿液/腦脊液/唾液/精液樣品
1． 準(zhǔn)備好1.5毫升離心管
2． 移取1毫升液體到離心管
3． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
5． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升到新的1.5毫升離心管
7． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
8． 放在冰槽里待測(cè)
選擇四：細(xì)胞培養(yǎng)上清
1． 準(zhǔn)備1瓶25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶的新鮮待測(cè)細(xì)胞
2． 小心移取細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
4． 小心移取上清液到新的15毫升錐形離心管
5． 移取10微升到新的1.5毫升離心管
6． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
7． 放在冰槽里待測(cè)
8． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里備用（1小時(shí)內(nèi)）
二、 樣品測(cè)定
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B）置于手心融化，HEPENGBIO稀釋液（Reagent C）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出10微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入90微升HEPENGBIO稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為HEPENGBIO染色工作液，置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1． 準(zhǔn)備1個(gè)黑色96孔板
2． 加入100微升上述制備的待測(cè)樣品
3． 加入10微升HEPENGBIO染色工作液
4． 輕輕搖動(dòng)黑色96孔板，混勻
5． 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育20分鐘
6． 即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)：（激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)530nm）――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 孵育時(shí)，避免光照
4． 測(cè)試前，細(xì)胞培養(yǎng)液須新鮮收集，1小時(shí)內(nèi)為最佳
5． 培養(yǎng)液上清須澄清
6． 如果測(cè)定體系變化，則試劑用量相應(yīng)變化
7． 建議染色完成后，即刻進(jìn)行熒光分析
8． 用戶可以使用維生素E作為陰性對(duì)照
9． 本公司同時(shí)提供體液活性氧高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒，滿足不同用戶需求
10． 本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品
產(chǎn)品信息價(jià)格說明書等相關(guān)資料，可以聯(lián)系客服咨詢索取。
HEPENGBIO體液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
HEPENGBIO體液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級(jí)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽，受到活性氧的氧化下，產(chǎn)生熒光，來定量檢測(cè)活性氧族的生成和增加的方法?？梢员挥糜诩?xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡?；钚匝跆禺愋蕴结槦晒馊玖?',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA），一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧化基、次氯酸等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測(cè)定活性氧族的濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO緩沖液（Reagent A） 5毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 50微升
HEPENGBIO稀釋液（Reagent C） 1毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
抗凝管：用于采血儲(chǔ)存的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和工作液配制的容器
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
黑色96孔板：用于樣品熒光染色的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光定量分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣品準(zhǔn)備
選擇一：血漿樣品
1． 準(zhǔn)備好抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
5． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升上述制備的血漿到新的1.5毫升離心管
7． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
8． 放在冰槽里待測(cè)
選擇二：血清樣品
1． 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管
2． 抽取1毫升血液，置于儲(chǔ)存管里
3． 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結(jié)
4． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
7． 移取10微升上述制備的血清到新的1.5毫升離心管
8． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
9． 放在冰槽里待測(cè)
選擇三：尿液/腦脊液/唾液/精液樣品
1． 準(zhǔn)備好1.5毫升離心管
2． 移取1毫升液體到離心管
3． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
5． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升到新的1.5毫升離心管
7． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
8． 放在冰槽里待測(cè)
選擇四：細(xì)胞培養(yǎng)上清
1． 準(zhǔn)備1瓶25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶的新鮮待測(cè)細(xì)胞
2． 小心移取細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
4． 小心移取上清液到新的15毫升錐形離心管
5． 移取10微升到新的1.5毫升離心管
6． 加入90微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A），混勻
7． 放在冰槽里待測(cè)
8． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里備用（1小時(shí)內(nèi)）
二、 樣品測(cè)定
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B）置于手心融化，HEPENGBIO稀釋液（Reagent C）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出10微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入90微升HEPENGBIO稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為HEPENGBIO染色工作液，置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1． 準(zhǔn)備1個(gè)黑色96孔板
2． 加入100微升上述制備的待測(cè)樣品
3． 加入10微升HEPENGBIO染色工作液
4． 輕輕搖動(dòng)黑色96孔板，混勻
5． 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育20分鐘
6． 即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)：（激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)530nm）――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 孵育時(shí)，避免光照
4． 測(cè)試前，細(xì)胞培養(yǎng)液須新鮮收集，1小時(shí)內(nèi)為最佳
5． 培養(yǎng)液上清須澄清
6． 如果測(cè)定體系變化，則試劑用量相應(yīng)變化
7． 建議染色完成后，即刻進(jìn)行熒光分析
8． 用戶可以使用維生素E作為陰性對(duì)照
9． 本公司同時(shí)提供體液活性氧高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒，滿足不同用戶需求
10． 本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品
